DB12T 504-2014 水稻转基因成分筛查方法
|
ID： |
C42E97E6F92E4F1493BE0000001878E8 |
|
文件大小(MB)： |
0.37 |
|
页数： |
9 |
|
文件格式： |
|
|
日期： |
2016-8-16 |
|
购买： |
文本摘录（文本识别可能有误，但文件阅览显示及打印正常，pdf文件可进行文字搜索定位）：
ICS 65.020.01,B 04,天津市地方标准,DB12,DB12/T 504—2014,水稻转基因成分筛查方法,Screening method for genetically modified rice,2014-04-22 发布 2014-07-20 实施,天津市质量技术监督局发布,DB12/T 504—2014,1,前 言,本标准按照GB/T 1.1—2009 给出的规则起草,本标准由天津市质量技术监督局提出,本标准起草单位：天津市东丽区产品质量监督检验所、天津市农业质量标准与检测技术研究所,本标准主要起草人：黄凤军、朱珠、易萌、杨炳存、刘文、赵新、李阳、闫荣卿,本标准2014 年04 月首次发布,DB12/T 504—2014,1,水稻转基因成分筛查方法,1 范围,本标准规定了水稻中转基因成分定性PCR 筛查的术语和定义、检测方法、结果分析与表述,本标准适用于水稻及其制品中SPS 基因、CaMV35S 启动子、NOS 终止子、Bt 基因、NPTII 基因和,HPT 基因的定性PCR 筛查检测,2 规范性引用文件,下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件,凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件,GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法,NY/T 672 转基因植物及其产品检测 通用要求,农业部1485 号公告—4—2010 转基因植物及其产品成分检测 DNA 提取和纯化,农业部2031 号公告—19—2013 转基因植物及其产品检测 抽样,3 术语和定义,下列术语和定义适用于本文件,3.1,SPS 基因 SPS gene,编码蔗糖磷酸合酶（sucrose phosphate synthase）的基因,3.2,CaMV 35S 启动子 35S promoter from cauliflower mosaic virus （CaMV）,来自花椰菜花叶病毒的35S 启动子,3.3,NOS 终止子 terminator of nopaline synthase （NOS） gene,来自胭脂碱合成酶基因NOS 的终止子,3.4,Bt 基因 Bt（Bacillus thuringiensis）gene,来源与苏云金芽胞杆菌（Bacillus thuringiensis，简称Bt），可表达一种杀虫晶体蛋白的基因，常见,的Bt基因有cry1Ac基因、cry1Ab基因、cry1Ab/cry1Ac融合基因,3.5,NPTII 基因 NPTII gene,来源于大肠杆菌（Escherichia coli），编码新霉素磷酸转移酶（neomycin phosphotransferase）的基,因,3.6,HPT 基因 HPT gene,来自大肠杆菌或链球菌（Streptomyceshy groscopicus），编码潮霉素磷酸转移酶（hygromycin,phosphotransferase）的基因,DB12/T 504—2014,2,4 检测方法,4.1 试剂和材料,4.1.1 实验用水为重蒸馏水或符合GB/T 6682 规定的一级水,4.1.2 琼脂糖,4.1.3 10 g/L 溴化乙锭溶液：称取1.0 g 溴化乙锭（EB），溶于100 mL 水中，避光保存,注：溴化乙锭有致癌作用，配制和使用时应戴一次性手套操作并妥善处理废液,4.1.4 10 mol/L 氢氧化钠溶液：在160 mL 水中加入80.0 g 氢氧化钠（NaOH），溶解后再加水定容,到200 mL,4.1.5 500 mmol/L 乙二铵四乙酸二钠溶液（pH 8.0）：称取18.6 g 乙二铵四乙酸二钠（EDTA-Na2）,加入70 mL 水中，再加入适量氢氧化钠溶液（4.1.4），加热至完全溶解后，冷却至室温，用氢氧化钠,溶液（4.1.4）调pH 至8.0，加水定容至100 mL。在103.4 kPa（121 ℃）条件下灭菌20 min,4.1.6 1 mol/L 三羟甲基氨基甲烷-盐酸溶液（pH 8.0）：称取121.1 g 三羟甲基氨基甲烷（Tris）溶,解于800 mL 水中，用盐酸调pH 至8.0，加水定容至1 000 mL。在103.4 kPa（121 ℃）条件下灭菌20 min,4.1.7 TE 缓冲液（pH 8.0）：分别量取10 mL 三羟甲基氨基甲烷-盐酸溶液（4.1.6）和2 mL 乙二铵,四乙酸二钠溶液（4.1.5），加水定容至1 000 mL。在103.4 kPa（121 ℃）条件下灭菌20 min,4.1.8 50×TAE 缓冲液：称取242.2 g 三羟甲基氨基甲烷（Tris），先用300 mL 水加热搅拌溶解后,加100 mL 乙二铵四乙酸二钠溶液（4.1.5），用冰乙酸调pH 至8.0，然后加水定容到1 000 mL。使用时,用水稀释成1×TAE,4.1.9 加样缓冲液：称取250.0 mg 溴酚蓝，加10 mL 水，在室温下溶解12 h；称取250.0 mg 二甲基,苯腈蓝，用10 mL 水溶解；称取50.0 g 蔗糖，用30 mL 水溶解。混合以上三种溶液，加水定容至100 mL,在4 ℃下保存,4.1.10 DNA 分子量标准：可以清楚的区分50 bp～1 000 bp 的DNA 片段,4.1.11 dNTPs 混合溶液：将浓度为10 mmol/L 的dATP、dTTP、dGTP、dCTP 四种脱氧核糖核苷酸,溶液等体积混合,4.1.12 Taq DNA 聚合酶、PCR 反应缓冲液及25 mmo……
……